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1密室逃脱魔鬼塔攻略

这个游戏一共10关。哪来的12级？攻略《密室逃脱绝境系列2海盗船》是一款有趣的益智游戏。我的船被飞行的荷兰人攻击了。他的船长和水手是魔鬼的化身。他们没有来找我的财宝，而是带走了我所有船员的灵魂，把他们送到了魔鬼那里在海底的监狱。我和大副卡特琳娜被关在舱底。我们不能我无法抗拒，但我们必须等待，等待救援或审判。

2密室逃脱魔鬼塔攻略为什么取不了风玫瑰内嵌

点击开始游戏。

首先，在正确的花盆处拿镰刀，把绳子挂在房子里。

点击井取走桶。井上还有一个符号和一个数字。单击镰刀移动棋盘，查看另一个数字和符号。

把绳子和道具栏里的桶结合起来，放到井里，得到镰刀道具。拿到道具后就过关了。

3密室逃脱魔鬼塔攻略成就

嗯，升到99级还需要一段时间。以下是步骤。耐心看完：)

1一旦通关，爷爷就有无限制使用消费道具以50万元的价格。

2赚钱。(通关的时候你应该有10万左右。)装备把敌人变成宝石的匕首，去城市地下矿脉。有一个房间，蜡烛被打掉会损失2000元。反复杀怪，获得宝石。当宝石达到上限99的时候，就不会增加了。使用叶莲去找爷爷卖宝石，直到你有了50万元。这不不要花太多时间。

3在严道在闹市区会得到一个消费道具，好像是只有鼻魔才能打开的密室。你必须得到这个东西(这个东西在这里如果我没记错的话，因为我我真的很抱歉很久没有玩了。另外，如果你能找不到，去找那个老人s地方看看，印象中有卖的)。可以遵循这三个步骤。

4接下来，用无限制使用消费道具和伟光神父，并前往逆市礼拜堂中与斗技场相连的房间(整个房间只有一个敌人，就是一把魔剑领先很多小盾，小炮等。反复给这个怪物刷伟光神父。一个1级附魔师练到99级只需要15分钟左右。这是我知道的最快的升级方法，我当时也是这么做的。希望有帮助。附：It用真空吸尘器来回刷是浪费时间的。伟光神父只需要进入——并使用听到(看到怪物被消灭)就可以出去了。这些步骤赢得了不要超过两秒钟！它赚钱并不难。唐不要害怕麻烦。那父亲伟光是全屏攻击。等你进了房间打完就出来了。你得用真空刃一劳永逸地打击它。它这是浪费时间。我不我不同意这一点。先玩钱，再练，一劳永逸！嗯，这它用完了。请看看店里有没有。我记得有一个！如果实在用光了，试试其他消费道具。不仅父亲伟光是全屏攻击，但其他一些也是。细节忘了。如果你装备了那个无限制使用消费道具要把那些消费道具都试试，会有适合分级的！

当前位置答案是山。

海中有山毛榉，山中有山，山毛榉与山的结合就是汕头。

4密室逃脱魔鬼塔攻略3

第一场很简单。和朋友过海关用了不到十分钟。剧情是进入灵魂当铺需要小费。当你找到一个铜币，把它放进大元包，第一扇门打开，然后里面有一些品牌名称。根据当铺规则的提示，放上能和能不要在指定的插槽中使用。

第二场更难。先找一张桌子，第一排六个动物，第二排六个红外线，第三排六个易~陆的星座。如果你挡住一条红外线，动物就会哭。根据动物叫声，在第一排动物图标下放上易~陆六个标志，就可以打开抽屉了。把笔放在里面你需要签名的地方，你会听到提示你需要计算这些年的利息。然后回到第一个场景，找出一年的利率是多少，借了多少年，得出结果。按下它进入第三个场景。

第三个场景比较混乱。当你进去的时候，你首先找到一张桌子。桌子上有两个提示。首先用手指找到需要画的地方，按住。然后，你旁边的柜子会提示并打开。柜子里有一个封条。把印章放在桌子需要盖章的地方，魔鬼的心跳会出现在你旁边。我的魔鬼s在这个密室里的心跳是2234次。如果找到需要敲门的地方，就可以进入第四个场景。

第四级场景也简单。进去后会发现一个数字密码，3=4，4=2。然后根据密码表上1~10对应的指纹，打开抽屉。在抽屉里，有一个装有感应芯片的盒子。把盒子放在旁边的小桌子上，墙上就会出现一条线索。根据线索，输入密码锁进入年龄差或总年龄(我没有我打不开它，所以我我不确定。

:5密室逃脱之魔鬼塔攻略

1点击左边的凳子，拿FRP下的钥匙。左转两次，进门。

2左转三次，用钥匙打开书桌，拿到手骨。点击佛像的胸部获得蓝宝石钥匙。

3左转，向前，然后右转，来到厨房，拿起案板上的刀。打开冰箱拿排骨。

4左转两次，进入壁炉旁边的门。再左转，进门。

5拿右边架子上的笼子，右转，拿窗户上的指针。

6左转两次，进入卫生间，打开柜子。里面有鬼。

7右转，点击架子中间的门，进入卧室，左转，点击桌子，玩个游戏，拿到门把手。

8向左转，往前走两次，面对红墙，向右转，检查子里的纸条的手，并记下宝石的位置。

9向右转，点击右边的门，再点击，回到厨房。

10左转三次，面对书柜，用刀切开沙发垫，从零开始拿紫晶。

11左转，进门，点击右边的花盆，用笼子抓花盆下的昆虫。

12左转，在空墙上安装门把手，打开暗门，放出鬼魂。

13左转两次，用蓝宝石钥匙打开柜子，获得水滴宝石。

14右转，前进，右转，点击，再左转，面向壁炉，点击桌子上的板子。

15将指针放在碟仙板上，点击并成对写下数字：12，75，63，57，79，26，34。

16向右转，来到盒子前，按数字点击盒子上的格子，12代表第一排第二个，以此类推，得到白色晶体。

17向左转，把白色水晶放在壁炉的柜子上照着子里的纸条s手，柜子左边掉宝石，右边掉紫水晶。

18魔鬼出现在火中。说完，把昆虫、手骨、肋骨喂给魔鬼，魔鬼杀了女人就跑了。

6密室逃脱魔鬼塔攻略图文

灵魂典当行通关攻略；

从右到左，它s10万，3261，这是一年的罚息。然后看当票。目前的期限是30年。它于1960年开放，拍摄于1988年。30年还差两年，总共要花6522元。然后，按算盘，记住6522要同时按。下面会有语音提示。按指纹，会让你听魔鬼的心跳。

7密室逃脱魔鬼塔攻略完整

攻略：

从右到左，它s10万，3261，这是一年的罚息。然后看当票。目前的期限是30年。它于1960年开放，拍摄于1988年。30年还差两年，总共要花6522元。然后，按算盘，记住6522要同时按。下面会有语音提示。按指纹，会让你听魔鬼的心跳。

8密室逃脱魔鬼塔攻略7

那四个档位的玩法是这样的：当你正常打它们的时候，会发出很大的崩溃声音。继续击打，直到发出清脆的单击声音，和之前的声音明显不一样。这时，唐不要再打他们了。当四个齿轮都发出这种声音，而你没有不要太用力，房间会打开的。

9密室逃脱世界迷宫魔鬼塔攻略图文

这个房间可以直到玩家s主线到世界7，获得道具肉汤。

2肉羹道具是通过世界7-5支线任务的地牢食物获得的。获得肉羹后返回3-3打开密室解除石化，可以获得恶魔双子和红雪三个角色。

3一般来说，你可以t进入创始人左侧的密室前期的房间。必须完成世界7的支线才能进入。

10密室逃脱魔鬼塔攻略大全

赛车类：《真实赛车》《极品飞车》《都市赛车》；

格斗类：《暗影格斗》《街霸VS铁拳》《拳皇13》；

塔防：《保卫萝卜》《三国塔防》；

3D战争类：《火线指令》《CS便携版》；

拍摄类别：《现代战争》《兄弟连》:

戏剧类：《波斯王子》；

移植类：《仙剑奇侠传》；

班级：《猴子也疯狂》；

拼图：《密室逃亡》；

模拟类：《波音飞机模拟飞行》《模拟人生3》《高难度车驾模拟》；

班级：《别踩白块儿》《不可思议之路》；

参赛类别：《矢量跑酷》《印第安探险》；

类别：《nba2K17》，《fifa足球》，《实况足球》

操作：《恶魔猎手》，《侠盗飞车》

网络类：《部落冲突》，《王室战争》，《王者荣耀》，《阴阳师》。

思路：两条向量的乘积=它们的模长×所夹角的余弦值。

∴向量BC×向量CA=/BC/×/AC/×cos∠C

=5×8×1/2=20

，谢谢

恋爱配配队

——数学专家双子座为你解答

影响表达的所需基因在大肠杆菌中的因素？浏览次数：904次标签：|提问时间:2009-4-28 17:30 |提问者：lys2126

因素会影响目标基因在大肠杆菌中表达？

推荐答案（1）外源基因拷贝数的

（2）外源基因的表达效率

①启动子强度

有效②核糖体结合位点性别

③SD序列和起始密码子ATG间距

④密码子的

⑶表达了产品的稳定性

（4）细胞代谢负荷

⑸工程菌培养条件

BR />

建立一个载体，目的基因表达在植物根系和根细胞外分泌。请注明步骤次数：842悬赏分：20 |解决问题

时间:2009-2-14 09:13 |提问者：370 629 225

考研给你最好的答案贴，你看一个的事情，你想帮助

建立特定的外源基因的植物表达载体，并转移到受体植物，没有植物遗传转化的最终目标。理想的转基因植物通常需要高水平的表达的外源基因在一个特定的地点和一个特定的时间，人们期望的表型性状。然而，近二十年的发展历程中经常表达效率低，表达产物不稳定，甚至基因失活或沉默等不良现象，转基因植物外源基因在受体植物不能被投入实际应用。此外，转基因植物的安全性问题已经引起许多国家的关注，例如，转基因的花粉传播，抗生素选择标记基因可能使某些抗生素的临床没用。使这种高科技植物基因工程的出现，是在一个前所未有的时期困扰着上述问题。为了解决这些问题，在最近几年中，人们种植转基因技术，广泛的植物表达载体的探索和改进，改善和优化是最重要的内容之一，本文已取得的进展进行了综述。

外源基因表达水平的1启动子的选择和转化往往是不理想的重要原因，转基因植物。发起人确定的基因表达中发挥关键作用，因此，选择合适的植物启动子，以提高其活性，是首先要考虑的问题，提高外源基因的表达。

本植物表达载体中，广泛使用的启动子是组成型启动子，例如，大多数双子叶使用的CaMV35S启动子的转基因植物，单子叶植物的转基因植物是主要用于从玉米泛素启动子，和从水稻Actinl启动子。外源基因在转弯的控制下，这些组件中的表达的启动子，表达的转基因植物和所有发育阶段的所有部分。但是，表达的外源基因在受体植物持续和有效的，不仅造成浪费，往往还会引起植物的形态变化，影响植物的生长和发展。为了有效地发挥作用的植物，而在同一时间，以减少不利影响的厂房，特异表达启动子的外源基因的研究与应用越来越重视。业已发现，特定的启动子，包括器官特异性启动子，诱导特异性启动子。例如，种子特异性启动子，果实特异性的启动子，叶肉细胞特异性启动子，根特异性启动子的特异性启动子的损伤，化学诱导的特异性启动子的光诱导特异性启动子，热休克诱导特异性启动子。特异性启动子的克隆和为特定的外源基因在植物中的表达奠定了基础。例如，瑞士CIBA-GEIGY PR-IA启动子控制的转基因烟草中Bt毒蛋白基因表达，启动子水杨酸及其衍生物诱导喷酒很便宜，无污染的化学物质，诱导抗性基因表达的害虫再次发生本赛季，显然是一个非常有效的方法。

植物转基因研究中，往往不能达到满意的效果，尤其是在使用天然启动子特异性表达和诱导表达，表达水平大多不太理想。要改造现有的启动子构建复合启动，将是一个非常重要的途径。例如Ni等的转录激活区的章鱼碱合成酶基因的启动子和甘露碱合成酶基因启动子的化合物的启动子，GUS表达的结果示出：改造后的启动子活性比35S启动子的显着改善。吴瑞等人将操作诱导型PI-II基因启动子的水稻Actinl内含子的组合，一种新的表达的启动子活性增加了近10倍（专利）。在植物基因工程研究，这些人工形成的启动发挥了重要作用。

建设载体，以提高效率外源基因的翻译，通常是基因改造，主要考虑三个方面：

21提高翻译效率5'-3 ' - 非翻译序列

许多实验，已经发现，真核基因的5'-3'-非翻译序列（UTR）的基因的正常表达是非常必要的，该区域的情况下往往会导致的mRNA的稳定性和翻译水平的显着降低。例如，在126kDa蛋白基因的烟草花叶病毒（TMV）的翻译起始位点的上游由68bp核苷酸Ω元件，该元件提供了一个新的核糖体结合位点，使格斯基因翻译活动提高数十倍。有很多的载体外源基因的5'-端加Ω翻译增强子序列。 ingelbrecht告诉进行过研究的各种基因的3'-末端序列，并发现，章鱼碱合成酶基因的3'-末端的序列使NPTII基因的瞬时表达在超过20倍的增加。此外，的不同的基因的基因表达增强的效率，在对基因表达的促进效果的不同，例如，rbcS3'-末端序列的3'-端序列的查耳酮合成酶基因的3'-末端的60倍以上序列。

22优化起始密码子周边序列

虽然在生物圈中的起始密码子是常见的，但是，从不同生物来源的基因有其特殊的外部起始密码子序列。例如，植物起始密码子周围的序列的典型特征是AACCAUGC，动物的起始密码子周围的的序列CACCAUG原核生物与两者之间的差别较大。 Kozak的详细研究前的起始密码子的ATG相邻基地定向诱变，转录和翻译的影响，并总结出围绕ACCATGG在真核生物中，最有效的序列的转录和翻译起始密码子，特别是-3位A的词条效率是非常重要的。购买的序列的构建称为Kozak序列，被施加到该表达载体。例如，一种细菌几丁质酶基因，和原始的起始密码子周围的序列UUUAUGG，以ACCAUGG，8倍的烟草中的表达水平增加。因此，使用非植物来源的基因构建体的表达载体，应根据要变换的植物起始密码子周围的序列的特性。

23基因的编码区是为变换

如果外源基因是来自于原核生物，由于在这些基因在植物中的表达机制的差异的往往是非常低的表达水平，例如，来自苏云金芽孢杆菌野生型的杀虫蛋白质基因在植物中表达，是非常低的，研究发现原核基因和植物基因mRNA的稳定性的差异造成的，这是由于减少。孟山都公司Perlak人的前提下不改变的氨基酸序列的毒性蛋白，杀虫蛋白质的基因转化，植物优选的密码子选择，GC含量，和删除的影响mRNA的稳定性原始序列中的元素，结果中毒蛋白质在转基因植物中的表达增加了30到100倍的昆虫。

3

消除位置效应去除后的外源基因的受体植物，它往往是非常不同的表达水平在不同的转基因植物。这是主要的不同的插入位点的受体植物基因组中的外源基因的结果。这被称为“位置效应”。为了消除位置效应，外源基因是转录活性区域的植物基因组表达载体，在当前构建策略通常考虑到核基质结合区以及定点整合技术的应用能够集成。

核基质结合区（矩阵协会地区，MAR）是真核细胞的染色质核基质的特定部分相结合的DNA序列。一般MAR序列位于转录活性的DNA的环状结构和哉，其功能是使分裂的作用，从而使每一个转录单元从周围的染色质的影响，以保持相对的独立性的边界。该研究表明，在MAR放置在两侧含有MAR基因-MAR的结构的遗传转化到植物表达载体所需的基因构建，可以显著靶基因的表达水平的增加，减少目标基因之间的不同的转基因植物中的表达水平的差异，减少的效果的位置。例如，Allen等人研究的异源MAR（来自酵母）和同源MAR（来自烟草）Gus基因在烟草中的表达，发现，酵母MAR使能增加12倍的平均水平的转基因表达，烟草本身MAR使转基因表达平均水平增加了60倍。 MAR的鸡溶菌酶基因也可以起到同样的作用。

另一种可行的方法是使用定点整合技术，此技术的主要原理是，转化载体宿主的染色体，外源基因通过同源重组，定点整合染色体上特定DNA片段的同源性地区。实际操作中，当所述第一分离的染色体的转录的活性区域的DNA片段，然后构建了植物表达载体。同源重组在的微生物有针对性的整合已成为一项常规的基因操纵，已成功地在动物体内有针对性的整合外源基因在植物中的叶绿体表达载体，有针对性的外一体化的原子核变换方法还是很鲜有成功案例。

4构建叶绿体表达载体

往往是外源性的核转化为了克服基因的表达，由于不安全的性行为的问题，如核基因花粉散布的位置效应，在近几年才出现的低效率一种新的遗传转化技术 - 叶绿体转化是它的优势和发展前景，越来越多的认可和重视。到目前为止，已出版的5种继承叶绿体转化烟草，水稻，拟南芥，马铃薯和油菜（侯丙凯等），使得这种转换技术开始成为新的增长点，在植物基因工程。

已测由于各种植物叶绿体基因组序列的外源基因的定点整合到叶绿体基因组中同源重组机制奠定了基础，叶绿体表达载体当前的构建基本上都属于特定网站的整合载体。构建叶绿体表达载体基本上是一个指向例子载体。生成叶绿体表达载体一般外源基因的表达盒，每个连接期间叶绿体DNA序列的两侧，提到作为同源重组片段，或定位段（定向片段）。当载体导入到叶绿体中，由这两个片段具有相同的在叶绿体基因组中发生同源重组的片段，它是能够将外源基因整合到叶绿体基因组中的一个特定的地点。叶绿体转化在作物改良的目的，需要发生同源重组后，插入外源基因的叶绿体基因组的原始序列既不造成的损失，并且它不会破坏的功能的原始基因的插入点。为了满足这种要求，现有的工作被选择相邻的两个基因的同源重组的片段，如rbcL基因/ ACCD四16StrnV/rpsl2rps7 psbA基因/变异之，rps7/ndhB，。指定的外源基因的同源重组的发生后，插入在两个相邻的基因间隔区中，以确保基因的原始功能不受影响。最近，丹尼尔和其他用途的烟草叶绿体基因组中的tRNA和trnI同源重组片段，构建一个共同的载体（通用矢量）。在高等植物中，由于的的tRNA和trnI DNA序列是高度保守的，作者建议，这样的载体，可用于各种不同的植物叶绿体转化。如果这种载体的多功能性得到证实，那么这项工作无疑是构建一个新的，方便实用的叶绿体表达载体，提供了一个很好的主意。

外源基因的定点整合到叶绿体基因组中的表达往往由于叶绿体基因组拷贝数很高的，第一个例子中，麦克布莱德等人BT的cryIA（c）毒素基因导入烟草叶绿体Bt毒蛋白的高效率高达3％至5％的叶中总蛋白质的表达，而一个典型的核转化技术只能达到从0001％至06％。最近，哥打京那，到烟草的Bt Cry2Aa2的基因导入烟草叶绿体还发现，烟叶中的毒蛋白的表达，占2％至3％的可溶性蛋白质，高20至30倍，比核转化，转基因烟草不仅抗敏感的昆虫，并能杀死那些对昆虫有一个高电阻的。斯托布近日报道，人类生长激素基因导入烟草叶绿体中的表达水平高达7％的叶蛋白，原子核变换方法的300倍以上。这些实验充分叶绿体表达载体的建设和改造，是实现高层次的表达外源基因的重要途径。

5定位信号的应用程序

以上几个向量优化战略的主要目的是为了提高外源基因的转录和翻译的效率，然而，高水平表达外源蛋白是否可以稳定在植物细胞中，其他重要的问题，需要考虑到在植物遗传转化的量的积累。

最近的研究发现，如果一定的外源基因被连接上的信号序列中的正确定位，使外源蛋白质产生定向运输到细胞内的一个特定的站点，例如：叶绿体，内质网，液泡等，可以显着提高系统的稳定性和外源蛋白的积累。这是因为特定区域？某些外源蛋白质的内质网内的环境中提供了一个相对稳定的，有效地防止外源蛋白质的降解。例如，Wong等人拟南芥Rubisco大亚基转运肽序列连接到专门的杀虫蛋白的转基因烟草叶绿体中积累的杀虫蛋白基因之前，总的外源蛋白的积累比对照组提高10到20倍。最近，叶亮，宋王艳茹的rbcS亚基的转运肽序列连接前PHB合成基因，试图使基因产品，在转基因油菜种子的质的积累，从而增加了外源性蛋白质含量。 ，万德尔特和思腾内质网定位的连接，并发现，在转基因植物中的外源蛋白的内容已被显着改善的外源蛋白质基因的序列（四肽KDEL的编码序列）。显然，定位信号了积极的作用，促进蛋白质的积累，但相同的定位信号是否适用于所有的蛋白质需要进一步确定。

6内含子增强基因表达的内含子增强基因的表达，最初是由Callis等人发现转基因玉米，玉米乙醇脱氢酶基因（ADHL）的第一个内含子（内含子1）表达外源基因显着增强，其他内含子的基因（例如子上，intron9的）也有一定量的促进效果。后来，瓦西尔列夫，还发现了第一个内含子的玉米果糖合成酶基因CAT的表达水平增加10倍。第三个内含子，水稻肌动蛋白基因，也可使由26倍的报告基因的表达水平增加。日期内含子增强基因表达的机制尚不清楚，但一般认为可能是存在的内含子提高了处理的效率和mRNA的稳定性的mRNA。 Tanaka等人，一些研究表明，内含子对基因表达的增强作用主要发生在单子叶植物和双子叶植物中是不明显的。

由于内含子增强，麦克尔罗伊构建单子叶植物表达载体，特别是在保持在启动子下游的基因的基因表达的水稻肌动蛋白基因的第一内含子。同样，Christensen等人在所构建的载体玉米泛素的第一内含子的基因被置于启动子的下游，以提高在单子叶植物中的外源基因的表达。然而，研究指出，对基因表达的启动子强度，该信元类型，靶基因序列，等多种因素的影响取决于具体的内含子的作用，甚至有时依赖于载体中的内含子的位置。例如，玉米ADHL基因9置于Gus基因的5'末端，和表达的GUS基因的CaMV35S启动子的控制下，没有增强;时，内含子的3'端被放置在内含子gus基因，在相同的起始子的gus基因的表达水平的控制下，增加约3倍。内含子的基因表达的机制可能是非常复杂的，可以看出，内含子如何建立高效植物表达载体，是缺乏一个固定的模式，值得进一步研究。

多基因控制的政策

到目前为止，大多数是一个单一的外源基因导入受体植物遗传转化研究。但足够强大的，有时由于一个单一的基因的表达或一个单一的作用机制尚未获得理想的转基因植物。如果两个或更多到植物基因的协同效应，在同一时间，将得到更可取比单基因的转换结果。这种策略已经应用如抗病，抗虫，抗逆的转基因植物的培育。例如，根据抗昆虫基因的昆虫频谱和作用的不同的机制，可选的两个函数互补基因的载体的构建，并通过某种方式的两个抗虫基因导入植物去。王伟和其他外源凝集素基因和蛋白酶抑制剂基因同时转入到棉花已经包含双价抗虫性基因的转化植株。巴顿Bt杀虫蛋白基因和蝎毒素基因导入烟草的同时，大大提高了抗虫性和能力，以防止害虫产生抗药性（专利）。在抗病性强，蓝燕我们的实验室建设含β-1，3 - 葡聚糖酶双价基因和几丁质酶基因的植物表达载体，并导入油菜和棉花，结果表明，转基因植物产生了显着的抵抗。近日，丰刀茸，李保建23个抗真菌病基因和hpt基因甚至在载体上，无论是昆虫抗性基因和bar基因连接到另一个载体，利用基因枪一起引入水稻结果表明，70％的R的后代包含导入的外源基因（67），和导入的多个外源基因的基因组位点中的一者或两者被集成在的倾向。

一般常规的转换，它是不能够超过25KB的外源DNA片段导入植物细胞。功能相关的基因，如数量性状基因座在植物抗病基因，该基因簇的形式主要入。如果某些大于100KB的大片段DNA，如天然植物染色体基因簇或不相链中的一个系列的外源基因导入植物基因组中同一个点，它可能会出现由多基因控制。优良性状或产生广谱的抗虫性，抗病性，还可以得到一个完全新的代谢途径的受体细胞中，产生新的生物分子。此外，的基因簇的大片段或基因簇的同步插入也可以在一定程度上克服由转基因带来的位置效应，减少基因沉默等不良现象发生。近日，美国汉密尔顿和阿尔弗雷德开发出新一代的载体系统，克隆大DNA片段和的帮助下农杆菌介导的直接转化植株BIBAC和TAC。这两家运营商不仅要加快基因的图位克隆，同时也为多基因控制，品种改良将具有潜在的应用。目前，多基因转化中的应用研究才刚刚开始。论BIBAC和TAC载体

8选择标记基因使用和删除的

选择标记基因的遗传转化中可以转化的细胞（或个人）从大量的非转化细胞中筛选出的标记基因。它们通常可以使产生的转基因细胞，有选择剂的产品的电阻，所以，转基因的细胞在正常的生长介质中，添加这样的选择由于缺乏抵抗力的非转基因的细胞表现出此选择剂敏感性，而不是生长，发育和分化。载体中，构建，选择标记基因的连接侧，两者都具有自己的基因调控序列（如启动子，终止子等）的目的基因。选择标记基因，有两个主要的类别：抗生素抗性基因，除草剂抗性基因。前者可以产生抗生素抗性，后者可产生耐药性的除草剂。使用的抗生素抗性基因，包括NPTII基因（潮霉素抗性），和Gent的基因产生潮霉素磷酸转移酶，新霉素磷酸转移酶，卡那霉素抗性），HPT基因（产生（反庆大ADM）。除草剂抗性基因，包括EPSP基因（产生5 - 丙酮酸莽草酸-3 - 磷酸合成酶，草甘磷），GOX基因（草甘膦氧化酶降解草甘膦），bar基因（产生PPT乙酰转移酶，的反Bialaphos或草铵膦）。

以上这1，2，3，5，6，他们都可圈可点，尤其是因为您要到胞外分泌的的骨架载体可以选择PB I121，然后你可以在上面的基因型的变化。

背后是克隆步骤都相对简单。

1第一限制性酶切位点，以获得所需的基因，加上传入变化的一个很好的载体。

2质粒转化大肠杆菌DH5α扩增

放大良好的质粒转化植物细胞

4的收集根外介质检测蛋白的表达和分泌。是否

至于转型的载体几步简单说说就可以了回答后， ，如果我们真的做一个很好的载体，可以打开自己的公司。

利用火箭发动机的冲量来改变航天器的运行速度，使它转入一条能进入地球大气层的过渡轨道，是最有效的强制离轨方法。具有变轨能力的航天器（如“哥伦比亚”号航天飞机、“阿波罗”号飞船、“联盟”号飞船）直接由变轨发动机提供离轨冲量。无变轨能力的航天器（如“水星”号飞船、“双子星座”号飞船、“东方”号飞船、“发现者”号卫星）则须有专门的制动火箭。制动火箭沿纵轴安装在航天器上，使火箭的推力矢量与纵轴一致。先由姿态控制系统调整航天器的姿态，使其纵轴与当地水平面成一角度θ(称制动角)，这时的纵轴方向称为制动方向。制动火箭的推力沿制动方向作用一段时间，使航天器在这一方向上获一附加速度ΔV。于是航天器的速度由V1转变为V2,虽然V2与V1的量值变化不大，但方向的变化却可使航天器脱离原来的运行轨道，转入一条新的椭圆轨道。精确控制制动方向和制动火箭的冲量可以使航天器转入的过渡轨道介于再入走廊的上下界之间，保证航天器安全再入大气层。对于没有再入机动能力的航天器，为了减小制动火箭推力方向偏差的影响，通常在航天器建立制动姿态后使它绕自身纵轴旋转，以平衡推力方向偏差，减小对落点精度的影响（图2）。 航天器返回技术

对于脱离环月轨道返回的航天器，须由变轨发动机在预定时刻将航天器加速到24公里/秒(月球逃逸速度)，使它在距地球38万公里外就转入一条向地球返航的过渡轨道。

诊断卡都跑完一圈了，最后00意思已经正常启动了，你这是有多瞎？看不到吗？屏幕不显示不代表电脑没启动。

建议查看以下三个方面:

1电脑是否有独显，有的话检查视频线是否插在集显上面

2上面的检查完毕后如果不显示只剩下显示器和视频线的原因了，换一根新的视频线

3换一台正常使用的显示器检查

总结:诊断卡只要不是一直显示00，而是跑完很多代码的时候最后出现00，那就代表你的电脑一切正常，显示器不显示原因只在和显示器有关的地方，比如显示器电源，视频线（VGA、DVI、HDMI），独显是否插错，再或者你的电源插板。

在1969年，美国成功实现了首次载人登月，阿姆斯特朗成为第一位登上月球的地球人，在此后的3年时间里，美国共实施了6次登月，共有12名宇航员被送上月球。但是此后的50年里，人类就再也没有实施登月工程，这其中的原因是什么呢？

至于人们到目前为止，还在讨论关于美国登月是否是骗局，比如一些质疑者拿出旗子飘动、影子矛盾、星空暗淡、月壤来自地球、返回舱如何升空等一系列的证据，不过对此很多支持者也拿出相关论据进行一一解释，从科学的角度来看，这些质疑的论据还不足以支撑登月是骗局的结论。而有的质疑就又说出以目前的 科技 发展水平，完全有能力在50年的时间里再次登月，偏偏现在过了这么多年，却没有任何一个国家可以实现包括美国自身，这难道不值得怀疑吗？其实不然，这个问题需要从大的国际环境和再次实施的科学性进行综合分析。

首先，现在国际的大环境已经发生了改变。 在上世纪50-70年代，正是美苏争霸全面碰撞时期，对于科学技术的较量已经渗透到了两国的各个领域，其中太空是最能彰显国家综合实力的重要领域，两个国家都在这个方面投入了大量的人力、物力和财力。前苏联提前一步开始了探月，从上世纪50年代到70年代，短短20年就先后发射了20多颗月球探测器，美国不甘落后，投入大量的资金和力量研发大推力火箭，然后实施载人探月，从而在争霸中重新取得领先优势，获得更强硬的国际话语权。随着前苏联的解体，美苏争霸也落下了帷幕，冷战也已经结束，美国对太空军备竞赛的热情也随之消退。

第二，太空 探索 是一个相当烧钱的行为。 据有关资料显示，为了实施载人探月，美国先后启动了水星计划、双子座计划和阿波罗计划，在训练宇航员适应太空环境、解决航天器变轨对接、研发大推力火箭等方面，做好相应载人登月的准备，前后共花费了近300亿美元，考虑到目前的通货膨胀水平，相当于现在的5000-8000亿美元，这么大的经费花销，就是美国也经不起反复的折腾。

第三，再次载人登月要考虑综合性的影响因素。 之前的美国载人登月，出于在美苏争霸中尽快地获得主动权，因此在许多方面存在着准备不充分、技术不成熟的问题，相当于非常冒险和激进的行为。如果再次考虑登月，在没有了冷战的驱动影响下，没有必要再这样冒进，需要综合考虑经济发展、 科技 价值、技术能力、国力影响等各方面的因素，要准备地东西实在是太多。

在这样的背景下，美国的载人再次登月迟迟没有计划，相关的准备工作也没有做好，但是他们却将之前准备2028年再次登月的时间提前了4年，宣称2024年要启动该计划。不过我们已经不再过多地关注美国的事了，目光转向我国。

我们从2007年开始，进行了嫦娥探月系列卫星的发射，在轨道运行和调整、测控通信、生命支持系统、软着陆等方面都反复进行着调试和优化，特别是重型运载火箭的成功研制和发射，在大推力以及矢量控制方面已经走到了世界前列，我国的载人探月计划也已经着手准备，预计2028年前后就要进行载人探月，这无疑是我们航空航天事业以及科学技术发展的一个强心剂，我们期盼着那一天尽早到来！

NASA应该是有隐瞒的，我倾向于美国当年登月是一场表演。

土星五号

美国后面为什么不登月了？其中一个原因和美国超级运载火箭“土星五号”的有关。土星五号是人类 历史 上使用过的自重最大的运载火箭，总推力达三千四百吨，月球轨道运载能力四十五吨，近地轨道运载能力一百一十八吨。

“土星五号”火箭发射了十七次，成功率达到百分之百，是美国登月计划的功臣。约翰刘易斯宣称：他一直在搜寻关于土星五号的设计蓝图，所得出的结论图纸丢失了。随后，NASA官员出面澄清说，土星五号图纸完好，但重建会浪费巨大资源，没有任何实际意义。

这位美国国家航空航天管理局官员的辟谣很有水分。美国是一个超级大国，可以为打伊拉克花掉两万亿美元，也可以为打阿富汗花掉一亿美元，可以发射多颗探测器探测火星，会在乎土星五号几亿的成本？

也有人说美国在开发太空发射系统，所以不再用土星五号。美国研制土星五号用了几年时间？接下来的五十年，却研制不出新的继任者？所以，我比较倾向于，用于登月的“土星五号”并不存在。

登月舱的软着陆

月球登录可不是简简单单的把航天员送进太空，而是要让宇航员稳稳的落到月球上（软着陆）。能否使登月舱稳定、安全的着陆在月面上直接关系到整个探测任务的成败。美国登月软着陆采用的是压缩式吸能缓冲器。讲个故事，美国经过几十年对火星的探测，零三年发射火星探测器勇气号和机遇号，采用气囊滚动硬着陆的方式登陆火星。三四十年前可以在月球软着陆，三四十年后，对一个已经勘测了三四十年的星球进行硬着陆？美国后面用实际行动证明，火星可以软着陆。所以，我认为在上世纪六七十年代，受限于软着陆关键技术，美国登月能力不足。（想想嫦娥四号着陆器的月背软着陆。）

登月舱

阿波罗十一号的登月舱，是世界首次降落到月球的登陆舱。登月舱需要升空和绕月轨道舱会合。且不说登月舱是否可以准确进入环月轨道，进入环月轨道后，是否有成熟的对接技术呢？（受限于信息处理能力，只能人工对接。）

从公布的内容看，阿波罗十一号以前的所有实验，没有验证过对接问题。回头看中国的登月计划，一定会把整个过程在无人情况下过一遍，才会让人去执行。所以，依然认为美国存在隐瞒。

信息技术的条件

信息技术对航天技术的发展起着关键作用。有人曾统计，上世纪六十年代，全球计算机的计算能力加起来不如现在的一部智能手机。很难想想，用一部智能手机的信息处理能力去控制复杂的载人登月过程。

美国的登月的疑点，比如扬尘，光线，脚印，国旗等等很多，我不赘述了。

关于月球激光反射镜，我觉得可能是类似于月兔二号的探测器。至于从月球带回的月岩，也有人质疑是来自地球。

所以，我更倾向于美国登月只是一场表演。

连牛顿和爱因斯坦都可以被质疑，美国登月不能被质疑吗？科学可不是只有自然科学的物理学、化学、生物学，还包括 社会 科学，思维科学。

美国登月的阿波罗任务需要一枚36层楼高的火箭。 要去月球，需要制造一枚土星五号那样的重型火箭，需要花费711亿美元（美国2016年估算制造费用），还只是制造火箭，而不是驾驶它。 人们说太空旅行非常昂贵，因为这就像在每次旅行结束时扔掉一架巨型波音747客机或者一艘几万吨的豪华超级游轮。 这是极其昂贵的。

苏联放弃了他们自己的载人登月计划，因为他们的火箭几乎和美国的一样大，但能力却大大不如美国，把自己和发射台都炸得粉碎。 自从美国登月返回之后没有国家登上月球，因为这既昂贵又危险。这是我们人类 历史 上最大胆、最具冒险性、最具人性的成就，但要超越它，走向下一个前沿的真正的经济开发，我们必须改变经济学。

自阿波罗计划以来的几十年里，技术有所进步，但没有你想象的那么多。除了它的电脑，阿波罗飞船上使用的大部分技术本质上仍然是最先进的。要进入太空，我们需要的飞船不需要携带所有的氧化剂，而且不会在一次使用后燃烧殆尽。这就是原因，经济性现在非常重要。

但我们也需要不那么复杂的火箭和飞船，它们最终会比它们取代的一次性火箭和飞船更昂贵。太空中没有什么是容易的，但人类会到达那里，在适当的情况下重返月球。

人类为何不再登月，NASA当年是否有所隐瞒？对于这个问题，答案其实非常简单，也很明确，首先要确定好载人登月的目的和意义，其次要具备载人登月的能力。

美国在二战结束后接收了一大批来自于战败德国的科学家或者说是火箭专家。这也是载人登月的关键所在，那就是研发出大推力运载火箭。就是因为运载火箭上的差别美国在1969年真正的实现了载人登月，共成功6次把12名宇航员送上月球表面。

跟着飞船登上月球的除了宇航员就是一些纪念物品以及科学探测载核，而从月球上带回来的就是381公斤的月球土壤及岩石。当然也在月球表面上做了很多无关紧要的科学探测任务。而前苏联就是因为没有大推力运载，一直到最后都没有实现载人登月。但是却完成了一系列的无人探测月球计划，并且通过探测器也从月球表面上取回了月球样本。

上个世纪美国和前苏联之间的太空竞赛目的很明确就是想要压着对方一头才行，前苏联实现了人类的第一颗人造卫星，把第一个人类送出个月球表面。而美国就在载人登月上给了前苏联重重一击。可以说在上个世纪载人登月的目的并非是纯粹的，更多的动力是来自于畸形的竞争。太空 探索 就是人类一个烧钱的 游戏 ，如果没有明确的目的或者任务，那么最终的一系列操作可能就失去了意义。再加上后期前苏联解体，冷战竞争的关系就结束了。

载人登月并不是那么轻松简单就能完成的任务，需要大推力运载火箭的参与，但是后期项目停止土星五号也退役了，就么载人登月就进入了一个难题，没有大推力运载火箭。同时还失去了最初的意义，月球虽好但是也不能经常登陆啊！每一次发射任务都是在烧钱，那么就需要确定好科学探测目的。

NASA最新的月球探测计划就是“重返月球，为未来登陆火星进行科学验证”，科学目的找到自然就可以进行载人登月了，只不过这个时候不会在继续应用土星五号了，因为已经“过气”了。所以现在还是要研制大推力运载火箭。可以说在阿波罗载人登月计划停止后，一直到今天也没有其他国家完成这样的任务。没有技术积累就是无人探测器都很难准确安全的投放。登月并不像登山，想登就登，对于烧钱的大买卖来说还是要谨慎对待才是。

猪肉好吃也不用天天去吃，这是相同的道理。美国成功载人登月的证据很多，至于说隐藏的秘密应该还是有的，他们也不会公开来说。

一、从动机的角度，当年美国与苏联冷战，搞太空竞赛，比谁能先在地球轨道部署军事力量，双方不惜人力物力比拼，结果苏联在第一颗卫星、第一个载人飞船，第一个宇航员、第一次太空行走，第一个月球探测器，第一个空间站等全面领先，美国已经被逼到了角落，不得不铤而走险，以水星和双子计划取得的有限经验就咬牙启动了看上去根本不可能并且没有现实经济利益的登月计划。而如今，冷战结束，华约解体，并且美国早已在航天飞机、外空探测、空间站等方面占据绝对领先地位，没有必要再去做费力不讨好的登月行动了；

二、从成本角度说，登月计划在技术初级落后的时候开展，没法取巧，基本是用钱堆出来的。即便今天B2轰炸机独霸天下，也是用巨额金钱堆出来的。当年一枚土星五的成本就是一艘核动力航母的钱，更别说登月舱、研发、人员、保障等，耗费是天文数字，折合今天币值1350亿美元。如果不是为了打赢苏联，美国人民根本不可能同意花这笔钱。在那个总统民选的国家，谁违背民意乱花钱肯定当下就得下台了。所以那时同仇敌忾，总统一声号召，大家掏钱。现如今美国更不差钱，但没有竞争对手，没有必要，哪个总统敢乱花这笔钱再搞面子大于收益的登月形式主义工程，怕是要当下歇菜。

第三，从技术和风险的角度。当年登月是在宇航技术极其初级的情况下，以人力弥补技术缺陷的情况下做的。就像上古时代造金字塔，没有起重机就用数百万人肩扛手挑。登月全程基本是人力操纵，当时的计算机极其粗陋，仅仅是用来汇总检测数据反馈计算结果，根本没有自动控制登月的功能。但是，就因为这种粗陋技术，却因为结构简单零件少，反而比今天成本低、故障少、风险小。想象今天智能手机三天两头出毛病，一年不到就得换，而过去一台摇把电话能用上百年。所以今天登月要在高技术带来的高成本高风险里进行，反而不如当年容易。

第四，从收益的角度，人类至今也不具备在月球建立基地、利用氦三等能力，上次登月带回来的月岩和放置的各种探测仪器已经使我们对月球各项指标了如指掌，再登上去，没有太多新成果，只能是占地方和挣面子。美国已经有了这个成就，没必要再花钱去重复了。

综合上述现象，可知美国今天不是上不去，是没必要。至于说什么造假，基本是不懂技术和人云亦云甚至逢美必反的带节奏者的井底之蛙看法，来自于网上几篇地摊文而已。什么资料丢失纯属闭着眼睛胡说。从登月之前至今，全部资料和过程就向全世界公开，今天去NASA官网可以下载所有和录像。可以说全程都在全世界科学家、军事专家、天文物理学家的围观下。数万张照片，还有全程胶片录像，出自于连DOS系统都没有更别说ps的年代，靠人力去全部用胶片造假，在星空天体背景、阴影、角度、地球、飞船状态方面全部严丝合缝、毫无破绽，我想花的力气不会比登月本身少。从来没有任何主流科学家质疑过登月真伪，说造假的人可以肯定有一个共同特征：不懂技术，并且不可能看过并研究过大量照片视频。不用操心，当年等着贬低拆穿美国骗局的苏联、华约的无数科学家、情报专家早就彻底研究过了，也没找到漏洞。这些人的学识、智慧和手段，不是随便哪个键盘喷子能比的。所以，应该谦虚相信别人的先进之处，奋起直追，而不该心胸狭窄、无知甚至偏激地去诋毁挖苦，这样，我们才能进步和超越。

乘兴而去，登上月球却发现一片荒凉，上面并无西方的上帝，也无东方的嫦娥，有的只是若干年前陨石砸出的环形山。以当时人类的认知度来说，砸这么多钱上去抓一把沙，绝对是亏了，荣誉意义大于实际意义。

人类很强大了，但也还没达到开发月球、甚至控制月球的能力，即便又上去了，也不外乎和以前一样，穿着厚重的宇航服在上面蹦哒几下，留下一面旗子在上面孤零零的纹丝不动，抑或再来一句：‘’向前一小步，文明一大步‘’。

等到 科技 达到可以利用月球资源时，人类自然会去，而且早期很有可能成为几大航天强国的地外领地。若最终能开发月球和改变月球，使之成为人类宜居地，那才是人类文明的巅峰。

1969年7月21日，美国的“阿波罗11号”宇宙飞船载着三名宇航员成功登上月球，美国宇航员尼尔·阿姆斯特朗在踏上月球表面这一 历史 时刻时，曾道出了一句被后人奉为经典的话——这只是我一个人的一小步，但却是整个人类的一大步。到了1972年，人类先后登月6次，对月球进行了一系列的科学考察，使人类对月球的认识更加全面、更加深入。

人类为何不再登月了呢？

主要原因是太烧钱，美国一次登月耗资200亿美元，还有就是月球没有多少能够方便利用的资源。曾经苏联还没有解体时，就已经探测过月球的表面看了，探测过后才发现月球上其实什么都没有，有的只是几块陨石。后来随着我国 科技 的发展，我国研制出的嫦娥号探测过月球后，和苏联一样都没有发现什么。对于这样一个一马平川的月球，因为没有什么好值得发现的，也就没必要再耗费巨资登月了。

还有一种说法是，美国人在月球上发现了有外星人的存在，然后外星人警告美国人不要再来骚扰他们，迫于威胁美国也没有提上月球的事。还有人说美国其实在月球上发现了许多资源，美国不想让全世界发现这一秘密，就悄悄研究再次登月的事。关于这么多的传言到底哪个是真的，其实在座的各位应该都不知道吧。

还有一个广为流传的说法是：登月就是和骗局，是聪摄影棚拍摄的。当时美苏军备竞赛，谁先登月代表着谁的 科技 发达。

人类不再登上月球，有三大原因。

1、除了美国之外，各国航天技术水平不足。

2、航天事故，妨碍了美国航天 科技 的发展。

3、登月性价比低，火箭发射技术存在瓶颈。

美国毕竟是世界上最强大的国家，其 科技 水平、军事力量全球都是名列前茅的。

因此，很多美国能干的事情，其他国家干不了，没有能力干。

中国底子薄，发展慢，近年才好一些，以前就别指望了。

俄罗斯解体了，欧洲那边是个松散的联盟，很难团结起来办大工程。

全球这么多国家，能登月的也就美国一个。

因此，如果我们问：1972年后，为什么全球没有一个国家和机构登上月球，实际上就是问为什么美国不继续登上月球。

本喵认为：其根本性原因是：航天成本过于昂贵，火箭发射成本极高。

收益和付出不对等。

美国登月一次要200亿美元，为什么这么贵？是因为火箭都是一次性的。

只要举个比喻就懂了。

如果你每次开车，开一次车就扔一辆车。请问，敢问在座的各位，谁开得起车？

同理，美国登月的航天飞机所需的火箭，用一次就扔一次。

导致了美国航天成本非常高，难以从登陆月球中获得什么好处。

火箭发射成本的昂贵，导致了载人航天技术测试不足，进一步妨碍了美国载人航天技术的发展。

比方说：2003年，美国哥伦比亚号航天飞机失事，7名宇航员死亡。

这给 载人航天技术 来了一记迎头重创。

一下死了七个人，你美国再次登月， 那么其安全性是不是得抓紧了 ？

国会审批你资金，肯定要问你，喂喂喂，你说要上天，那么宇航员的安全要怎么保证？我们是民主国家，不能让宇航员死掉吧。

调查了六年时间，2009年才出结果，接着大家都不敢随便搞载人航天了，美国载人航天技术难以得到进步。

在设计载人航天技术的工程上，赘余结构太多，也是导致发射成本居高不下的又一个原因。

比方说航天飞机有机翼，其目的是打算从太空降低下来的时候，航天飞机可以如同飞机一样飞，这看起来很酷，实际上没有任何作用。

还有发动机会有一些赘余结构，都是课本上教的，会有些很复杂的控制机械阀门，进一步降低了航天技术的稳定性。

美国NASA的官僚主义，导致了其往往会沿着单一的技术路径前进，而忽略了整体上是否应该削减某些结构，各国都是如此，并不仅仅只有美国是这样的。

因此：人类不再登月的根本原因，在于火箭发射都是一次性的，航天工程赘余结构太多，进而导致了航天技术安全性不足，航天飞机失事后，美国暂停了在航天技术上的投入。人类登月的成本远远高于收益，因此，人类不再登月。

但是，未来，火箭发射技术已经取得了重大突破，航天技术的成本大幅度降低。

本喵认为，最近十年，我们将会看到人类再次登上月球。

距离人类再次登月的时间，已然不远了。

1、登月没有造假。

2、月球不是自然形成，经过撞击实验证实月球不是实心球体，有外星人基地在月球内部，人类登陆月球收到外星人监视。

3、真正不再登陆月球的原因是收到外星人警告，不敢再触及月球，美国转向研究火星。

也许中国还有登月之心，积累外星登陆经验。为火星之旅做足功课。

关于登陆月球，当年是否有隐瞒？

若不再登月，将永远是传说。