1 生产环境草菇菌种的生产环境应符合下列要求:(1)远离有"三废"污染的工厂、生活区、禽畜养殖场等;(2)选用清洁水源,水质符合GB 5749规定;(3)选择地势较高、排水良好的环境;(4)菌种培养应在保温、保湿、通风和光照良好的室内进行。
2 母种生产 21 培养基配方去皮马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂20 g,蒸馏水 1 000 mL。 22 培养基制作 221 配制 将马铃薯切成05 cm×05 cm×05cm左右的方形小粒,加入蒸馏水1 000 mL,置于锅内(小铝锅或不锈钢锅)煮沸20~30 min。煮至马铃薯熟而不烂时,趁热用4层纱布过滤,获得马铃薯抽提液,然后把琼脂加入抽提液中继续加热,边加热边搅拌,直到琼脂完全熔解,加入葡萄糖,补充蒸馏水至1 000 mL,充分搅拌均匀。 222 分装 将配制好的培养基用玻璃试管分装,装量为每管8~15 mL,高度为试管长的1/5左右。将试管口抹干净,随后塞入棉塞或硅胶塞,并用牛皮纸包扎。 223 灭菌 将包扎好的试管直立放在高压灭菌锅内加热灭菌。加热到压力达005 MPa时,打开排气阀,排尽锅内空气,待压力表指针回复到0时,关闭排气阀。重复操作2次。当压力升到01 MPa(温度为121℃)时维持30 min后停止加热,待指针回复到0时,打开锅盖,取出试管,并趁热将试管倾斜摆放在桌面上,试管口比试管底部高1~15 cm,冷却后形成培养基斜面,斜面长度为试管长度的1/2~3/5。 224 灭菌效果检查 将灭菌后的培养基置于(30±2)℃条件下1~2天,检查是否有细菌或霉菌的菌斑。 23 消毒 将接种用具、培养基放到接种箱或超净工作台内。接种箱应用气雾消毒剂消毒,用量为5 g/m3;或用紫外线灭菌灯照射30 min。超净工作台使用前应开机预热30 min。 24 接种 消毒后进行接种。接种人员要注意卫生,戴口罩,手部和试管表面要用70%~75%医用酒精消毒。接种用具用酒精灯进行火焰灭菌,放于接种箱内支架上冷却后备用。接种操作在酒精灯火焰四周的无菌区进行。接种时,左手同时握着转接母种试管和待接斜面培养基试管,试管口置于酒精灯火焰上方3 cm处的无菌区,右手迅速拔开棉花塞,并用接种钩在转接母种试管中挑取绿豆粒大小的菌种体迅速转接到待接斜面培养基中。接种位置为培养基斜面前端1 cm处,且菌种体菌丝面朝上,接种后迅速塞上棉花塞。将已接种的斜面培养基试管用牛皮纸包扎试管口,并于距试管口8 cm处贴上标有菌号和接种日期的标签。 25 培养 将接种后的试管置于30~32℃培养箱或培养室恒温培养5~7天,当菌丝长满试管并产生少量红褐色厚垣孢子时结束培养。 26 性状指标 菌丝应呈灰白至黄白色,浓密粗壮,萌发生长快分布均匀。气生菌丝旺盛,爬壁力强,分枝角度大,能产生大量红褐色的厚垣孢子。 27 保藏在15~20℃下保存,每隔2~3个月转接1次每个菌株最多转接4次。
3 原种生产 31 栽培基质要求应符合食用菌栽培基质安全技术要求(NY5099的规定。 32 培养料配方棉籽壳100 kg、麸皮6~8 kg、生石灰4~5 kg,料水比1∶14~15,pH 80~90。 33 堆制发酵将培养料按配比混合,预湿后起堆,堆沤发酵4~5天。堆沤期间翻料1次。 34 装瓶装料时要求pH值不低于80,含水量为60%~65%。用750 mL玻璃菌种瓶装料,装至瓶肩为度,稍压实培养料,塞上棉花塞后,用牛皮纸包扎。 35 灭菌将分装好的原种培养料移入高压蒸汽灭菌锅内密闭加热灭菌。当压力升至005 MPa时打开排气阀,排放锅内空气,待压力降至0时关闭排气阀,继续加热升温;当压力升至01 MPa时打开排气阀,排放锅内空气,待压力降至0时关闭排气阀,继续加热升温;保持压力014~015 MPa(温度为126℃),2 h后停止加热,当灭菌锅压力降至0时取出培养料进行冷却。 36 消毒与接种消毒和接种与母种生产相同,每管母种接5~10瓶原种。 37 培养在30~32℃下培养10~12天,待菌丝长满瓶并在瓶肩形成红褐色厚垣孢子时结束培养。 38 性状指标菌丝灰白至黄白色,粗壮、密集,萌发生长快,分布均匀,在瓶肩形成大量红褐色的厚垣孢子。 39 保藏在15~20℃下保藏不超过30天。 4 栽培种生产按原种生产。装料采用750 mL菌种瓶,或采用13 cm×26 cm×005 mm规格聚丙烯塑料袋。灭菌按原种生产灭菌方法进行,也可以在100℃下保持10~12 h。每瓶原种接50~100瓶(或袋),接种后在15~20℃下保藏不超过20天。性状指标应符合38规定。
罐头是经久耐藏、携带方便、营养丰富、食用卫生的食品。草菇罐头加工的工艺流程、技术要点及其注意事项如下。
(1)草菇罐头加工工艺流程鲜菇验收→修整→第1次预煮→冷却→第2次预煮→冷却→漂洗→挑选分级→装罐→加汤液→排气密封→杀菌→冷却→培养→质量检验。(2)草菇罐头加工的技术要点①原料验收。必须严格按鲜菇等级标准进行验收,标明等级,分别装放在干净的容器中。
②修整。剔除杂物、开伞、破头等不合格菇。用小刀将菇根基部泥沙、草屑等清除干净,修削面保持整齐光滑,然后立即用清水漂洗干净。
③预煮与冷却。用夹层锅或铝锅预煮,把清水烧开,将草菇置于沸水中预煮2次(水与菇之比为2∶1)。第1次煮5~8分钟,用冷水漂洗,再换水煮5~8分钟,预煮后用清水或流动水迅速冷却与漂洗。如收购点离加工厂较远,可将修整好的草菇放入沸水中预煮5~7分钟,然后用冷水迅速冷透,装入干净的塑料桶内,加入25%的盐水和2%的柠檬酸溶液,立即送往加工厂。
④挑选分级。完整草菇分大、中、小3级供加工整菇罐头,破裂等碎菇可供作切片菇罐头。大菇,横径3~4厘米,纵径(菇体高,下同)5厘米;中菇,横径2~3厘米,纵径4厘米;小菇,横径15~2厘米,纵径3厘米。
⑤装罐。525克的罐头瓶装菇260~270克,315克的罐头瓶装菇150~160克。
⑥加汤液。用热水49升,加入1千克食盐,25克柠檬酸,待食盐充分溶化后,用绒布或6~8层纱布过滤,汤液的温度控制在70~80℃,加至离瓶口1厘米。
⑦排气、密封。加汤液后的罐头采用加热排气法,排气时间10~15分钟,罐内中心温度为75~80℃时方可密封,其罐内真空度要求达到4667~6667千帕。
⑧杀菌、冷却。封罐后的罐头立即送入杀菌锅杀菌(如选用立式杀菌锅,将水进行预热,水温控制在60℃左右,锅内水应高于罐头10~15厘米)。杀菌公式:30分钟—60分钟—反压冷却/118℃,冷却至50℃,利用余热干燥容器表面。
⑨培养检验。将杀菌后的罐头堆放在35~37℃下,培养5~7天,每批罐头按照1%~3%的比例抽样进行生物指标检验,符合产品质量标准的罐头出厂。(3)注意事项及要求①草菇属高温型菇,而且是在夏季出菇,采后极易破膜开伞,必须及时采取处理措施,终止草菇的生命活动,防止其继续生长。在距加工厂远的产区,可就地预煮冷却后及时带汤运回工厂。②严防煮熟的草菇在运输途中酸败变质。③清晨采菇时,禁用煤油灯照明,以免影响草菇风味。④装鲜菇的包装物要洁净,禁用混有其他化学药品的包装物。⑤草菇罐头易产生酸败质量事故,因此,工艺流程要一气呵成,杀菌时间与温度必须严格控制。
白羊座:木槿
幸运花秋牡丹
白羊座个性明朗活泼,精力旺盛,富挑战性,具有领导能力,但过于直率,容易得罪别人,脾气暴躁,缺乏耐心。代表白羊座的星座花有樱花、翠菊、木槿、星辰花、油菜花、勿忘我、矢车菊、吊钟花等。翠菊可赋予拥有者改变事物的决断力和行动力;木槿具有克服爱情障碍、解除爱情困扰的功能;星辰花可授与拥有者丰富的冒险心。
金牛座:矮牵牛
幸运花紫罗兰、玫瑰、水仙
金牛座个性沉稳,值得信赖,对于认定的事情执着,即使做错了也绝不回头。性情虽然感觉和蔼可亲,但是对于某一方面来说却十分高傲。而且喜欢追求感官逸乐,偏重物质,是个十分务实的人,但是有偏爱于 浪漫。对于爱情,金牛座永远是物质第一,不相信爱情。代表金牛座的星座花有海芋、康乃馨、矮牵牛、牡丹、风铃草、紫丁香等。海芋可以带给你端庄大方的优雅及获致爱情的力量;矮牵牛可增长金钱运,在感情上,可以促使你与对方自然发展。
双子座:玫瑰
幸运花铃兰、野玫瑰
双子座个性开朗,机灵活泼,口才好,人缘佳,通常是多才多艺,但比较敏感,略带神经质,是典型的双重个性。代表双子座的星座花有剑兰、玫瑰、白鹤芋、夜来香、洋绣球、茉莉花、麦杆菊、羽扇豆等。玫瑰让你热情洋溢,具有知性及丰富的能力;白鹤芋可带给你像风一样的爽朗个性;夜来香具有力量可以使你在沟通协调上,更加圆满顺利。
巨蟹座:洋桔梗
幸运花待霄草、百合
巨蟹座个性保守,温柔含蓄,善于照顾别人,给人温暖安全的感觉。但不擅于表达内心的感受,情绪比较敏感脆弱。代表巨蟹座的星座花有百合、野姜花、气重葛、洋桔梗、铁线莲、百子莲、薰衣草等。百合可带给你敏感的心和丰富的想像力;野姜花具有居住的幸运因素;洋桔梗则会带给你亲切、敏锐和同情的心。
狮子座:向日葵
幸运花向日葵
狮子座个性豪爽,喜欢交际,重视朋友,经常是团体中的焦点人物,但生性豪华,爱挥霍,喜欢掌握权力,不受人支配。代表狮子座的星座花有火鹤花、向日葵、天竺葵、千日红、黄波斯菊、虞美人草、美女樱、蛇目菊等。向日葵对于火的星座,有强力提升爱情运的作用;天竺葵显眼美丽,具有提升你气运的力量,使你成为八面玲珑的中心人物;千日红可以带给华丽的形象,并能提升爱情运。
处女座:大理花幸运花大波斯菊、风信子
处女座的人纯真、有洁癖,做事计画周详,知识丰富,但是害羞内向,略带神经质,偶尔会吹毛求疵。代表处女座的星座花有大理花、一串红、鸡冠花、扶桑花、桔梗、美人蕉、万寿菊、石蒜、龙胆等。大理花有提升头脑灵活、做事细心的力量;一串红可带给你良好的健康运,提升工作能力;鸡冠花会强化你爱好打扮的欲望,让你散发出整齐清洁的魅力。
天秤座:大波斯菊
幸运花紫罗兰、红玫瑰、铃兰
天秤座冷静多谋,仪态优雅,是天生的绅士淑女,凡事保持中庸态度,待人处事公正,但依赖心强,有逃避现实的倾向。代表天秤座的星座花有非洲菊、大波斯菊、蕾丝花、白孔雀、芙蓉、芒花、油点草、紫苑等。非洲菊有助于你结婚运的提升,增加与他人协调的能力;大波斯菊可以引发你的魅力,亦有提升结婚运的作用;蕾丝花可赋与你高尚、有魅力的个性;白孔雀使你人缘良好。
天蝎座:秋海棠
幸运花龙胆、石竹
天蝎座个性坚强,具有敏锐的感觉,做事全力以赴,外表冷漠神秘、内心炽热、嫉妒心和独占欲很强,令人觉得不好相处。代表天蝎座的星座花有菊花、桂花、秋海棠、马缨丹、睡莲、茶梅、琉璃菊等。菊花有除旧布新的作用,当旧的恋情逝去时,新的恋情又会展现;桂花使你散发出性感魅力,提升对异性的吸引力;秋海棠可以使你具有坚定的信念来达成目标。
射手座:蝴蝶兰
幸运花水仙、车前草
射手座天生具有贵族气质,装扮体面,言行高雅,乐观活泼,但过度崇尚自由,喜爱刺激,用情不专。代表射手座的星座花有蝴蝶兰、天堂鸟花、长寿花、仙客来、文心兰、加得利亚兰、瓜叶菊、非洲堇等。蝴蝶兰做为射手座的守护花,职掌保护与幸运;天堂鸟花会带给你知性和野性的独特魅力;长寿花能使你不拘泥于琐碎小事,具有干脆爽快的个性。
摩羯座:满天星
幸运花康乃馨、鸡冠
摩羯座刻苦耐劳,不屈不挠,克勤克俭,工作全力以赴,生活却平淡无趣。代表摩羯座的星座花有水仙、满天星、东亚兰、圣诞红、拖鞋兰、番红花、风信子、绣球花、雏菊等。水仙带给你实力;满天心让你具有幽默的意识;东亚兰具有支持你晋升调薪、考试合格、在社会获致成功的作用;圣诞红可以培养你的社会性,并提升工作运。
水瓶座:玛格丽特
幸运花水仙、樱草、三色紫罗兰
水瓶座是博爱主义者,待人亲切但不深交,充满智慧却缺乏热心,崇尚自由,兼具理性与冷淡。代表水瓶座的星座花有茶花、小苍兰、银柳、玛格丽特菊、金鱼草、樱草花、紫罗兰、西洋水仙。银柳象征自由与无拘无束,以之为水瓶座的守护花,具有解除身心束缚的功能;玛格丽特菊适合玩爱情占卜游戏,据说持有它较能拥有公平对待朋友的能力。
双鱼座:郁金香
幸运花紫罗兰、茉莉、勿忘我
双鱼座的人温柔浪漫,具有直觉性和艺术性,肯自我牺性,但性格多变,不易下正确的判断。代表双鱼座的星座花有郁金香、香豌豆、爱丽丝、金雀花、小花康乃馨、花菱草、报春花、桃花。郁金香会授与持有者强烈的同情心,甘于自我牺牲;香豌豆花职掌柏拉图式的爱情,可以增加男女间的精神联系;爱丽丝可赋予持有者丰富和敏锐的艺术感受力。
玫瑰:爱情、爱与美、容光焕发
玫瑰(红):热情、热爱着您
玫瑰(粉红):感动、爱的宣言、铭记于心 、初恋
玫瑰(白):天真、纯洁、尊敬
玫瑰(黄):不贞、嫉妒
玫瑰(捧花):幸福之爱
玫瑰 (花苞): 美丽和青春
玫瑰 (红+白): 共有
玫瑰 (红+黄): 快乐
玫瑰(蓝):清纯的爱 敦厚善良
玫瑰(绿):纯真简朴 青春长驻2朵玫瑰花语----这世界只有我俩!
3朵玫瑰花语----我爱你 I LOVE YOU!
4朵玫瑰花语----至死不渝!
5朵玫瑰花语----由衷欣赏!
6朵玫瑰花语----互敬互爱互谅!
7朵玫瑰花语----我偷偷地爱著你!
8朵玫瑰花语----感谢你的关怀扶持及鼓励!
9朵玫瑰花语----长久 ALWAYS!
10朵玫瑰花语----十全十美无懈可击!
11朵玫瑰花语----最爱只在乎你一人!
12朵玫瑰花语----对你的爱与日俱增!
13朵玫瑰花语----友谊长存!
14朵玫瑰花语----骄傲!
15朵玫瑰花语----对你感到歉意I''''M SORRY!
16朵玫瑰花语----多变不安的爱情!
17朵玫瑰花语----绝望无可挽回的爱!
18朵玫瑰花语----真诚与坦白!
19朵玫瑰花语----忍耐与期待!
20朵玫瑰花语----我仅一颗赤诚的心!
21朵玫瑰花语----真诚的爱!
22朵玫瑰花语----祝你好运!
25朵玫瑰花语----祝你幸福!
30朵玫瑰花语----信是有缘!
36朵玫瑰花语----浪漫!
40朵玫瑰花语----誓死不渝的爱情!
50朵玫瑰花语----邂逅不期而遇!
99朵玫瑰花语----天长地久 FOREVER!
100朵玫瑰花语----百分之百的爱 100% LOVE!
101朵玫瑰花语----最……最爱!
108朵玫瑰花语----求婚!
144朵玫瑰花语----爱你生生世世
365朵玫瑰花语----天天想你
999朵玫瑰花语----天长地久
1001朵玫瑰花语----直到永远
樱花的花语:纯洁。
莲花的花语:信仰。
橄榄的花语:和平。
**花的花语:遗忘。
银木星的花语:初恋。
亚卡夏的花语:友情。
黄玫瑰的花语: 分手。
向日葵的花语: 爱慕。
油菜花的花语:奉献。
紫罗兰的花语: 相信我。
番红花的花语: 等待你。
毛地黄的花语:不诚实。
桃花的花语:爱情俘虏。
紫菀的花语:反省追思。
茉莉的花语:胆小内向。
紫薇的花语:沈迷的爱
玫瑰的花语:爱和艳情。
熏衣草的花语:等待爱情。
松虫草的花语:寡妇的悲哀。
彩叶草的花语:绝望的恋情。
金盏菊的花语:借别、离别之痛,
霍香蓟的花语:信赖,相信能得到答覆。
拉云拉花的花语:不可靠。
卡斯诺尔的花语是:请原谅我。
玛格丽特木春菊 的花语: 暗恋。
紫色郁金香的花语:永恒的爱。
龙头花又名金鱼草的花语:多嘴、好管闲事。
桔梗花-真诚不变的爱
白玫瑰-我足以与你相配
熏衣草-等待爱情
红色风信子-让人感动的爱
时钟花-爱在你身边
狗尾巴草-暗恋
油桐花-情窦初开
樱花- 生命/等你回来
黑色曼佗罗-无间的爱和复仇,绝望的爱,不可预知的死亡和爱
向日葵-沉默的爱
蓝色妖姬-相守是一种承诺,人世轮回中,怎样才能拥有一份温柔的情意!双枝蓝色妖姬花语:相遇是一种宿命,心灵的交汇让我们有诉不尽的浪漫情怀。而如果是三枝蓝色妖姬,送花人表达的是另一种情愫——你是我最深的爱恋希望永远铭记我们这段美丽的爱情故事!
红蔷薇-热恋
粉蔷薇-爱的誓言
白蔷薇-纯洁的爱情
黄蔷薇-永恒的微笑
深红色蔷薇-只想和你在一起
粉红色蔷薇-我要与你过你辈子
圣诞蔷薇-追忆的爱情
野蔷薇-浪漫的爱情
水仙花-只爱自己
仙人掌-坚硬坚强
四叶草-叶代表祈求 二叶代表希望三叶代表爱情 四叶代表幸福
彼岸花-悲伤的回忆(日本)/相互思念(韩国)
栀子花-永恒的爱/一生的守侯/我们的爱
蔷薇-爱的思念
蒲公英-无法停留的爱
昙花-刹那的美丽,一瞬间永恒
桔梗:真诚不变的爱
波斯菊-永远快乐
卡萨布兰卡: [1]伟大的爱 [2]一种充满回忆的花,花语是淡泊的永恒 [3]易变的心 [4]不要放弃一个你深爱着的人 [5]死亡,一种盛开的很傲然,厌世的花 [6]一种永恒的美 [7]负担不起的爱
鸢尾-绝望的爱
蓝色鸢尾-宿命中的游离和破碎的激情,精致的美丽,可是易碎且易逝
迷迭香-回忆不想忘记得过去,纪念
龙舌兰-是为爱付出一切
蔷薇-你的一切都很可爱
松虫草-寡妇的悲哀
含羞草-自卑
夜来香-在危险边缘寻乐
向日葵-爱慕
非洲菊-永远快乐
香槟玫瑰-我只钟情你一个&爱上你是我今生最大的幸福,想你是我最甜蜜的痛苦,和你在一起是我的骄傲,没有你的我就像一只迷失了航线的船。
山樱花-纯洁/高尚/淡薄/
百合-纯洁/神圣
菖蒲-相信者的幸福
木棉花-珍惜眼前的幸福
德国菖蒲-婚姻完美
雏菊-隐藏爱情
茉莉花-你是我的
密蒙花-请幸福到来
紫滕花-对你执着,最幸福的时刻
蝴蝶花-相信就是幸福
龙胆花-喜欢看忧伤时的你
蝴蝶兰-我爱你
旭日藤-爱的锁链
风信子-永远的怀念
星辰花-永不变心
爱丽丝-想你
火百合-热烈的爱
紫玫瑰-珍惜的爱
鳞托菊-永远的爱
麦杆菊-永恒的记忆
牵牛花-爱情永固
黄玫瑰-褪色的爱
白日菊-永失我爱
野荀麻花-相爱
茉莉-莫离
丁香-回忆
紫云英—没有爱的期待
茉莉-幸福,就是你属于我
蓝色水菊-善变固执无情的你
红色天竺葵-你在我的脑海挥之不去
粉红色天竺葵-很高兴能陪在你身边
红色仙客-你真漂亮
粉红色山茶花-是你的爱让我越变越美丽
白色菊花-真实坦诚
红色素菊,玫瑰---我爱你
白色花束-把我的一切都奉献给你
雪莲花-祈愿愿望达成后的安慰
蓝色玫瑰-无法得到的东西
四叶幸运草-梦想成真
香水百合-纯洁,高贵
白色的铃兰-幸福即将到来
香摈玫瑰-梦幻的感觉
郁金香-热情的爱
风铃草-温柔的爱
百慕达奶油花-坚韧顽强
三叶是幸福 四叶是奇迹
波斯菊—天天快乐
圣诞花-美满冷漠,会受苦
茶花-你值得敬慕
杜鹃花-为了我保重你自己,温暖的,脆的,强烈的感情
连翘-预料
大岩酮一见钟情 高贵大方,有福气
金鱼草-欺骗,高尚的女士,力量
紫罗兰-感情的监禁,机敏,对我而言你永远那么美
天竺葵-偶然的相遇
薄荷-美德
金凤花-智慧
曼佗罗-不可欲知的死亡和爱
爱丽丝花-好消息 想你
三色堇-美丽的红色花卉,花语是‘思虑’,属性火。
**三色堇-有着**花瓣的三色堇,花语是‘忧喜参半’,属性土。
紫色三色堇-有着紫色花瓣的三色堇,花语是‘沉默不语’,属性暗。
彩叶草-绝望的恋情
矢车菊-单身的幸福
海芋-希望,雄壮之美
仙人掌-你是我的天使 / 温暖
大波斯菊-少女真实的心
迷失香-留住回忆
情人草-完美爱情
银莲花-失去的希望
小苍兰-纯洁、幸福、清新舒畅
大理花-华丽、优雅
翠菊-追想可靠的爱情、请相信我
虞美人-安慰
蓍草-安慰
玉簪花-恬静!宽和
时钟花-爱在你身边
刺槐-友谊
忘忧草-放下他(她)放下忧愁
石竹-奔放、幻想
杨柳-依依不舍
红枫 -热忱
牵牛花-爱情永固
香雪兰-纯洁
红豆 -相思
荼蘼-末路的美
天堂鸟-自由、幸福、吉祥
白玫瑰-我足以与你相配,你是唯一与我相配的人
欧石楠-孤独与背叛
菌种,好比农作物的种子,是食用菌生产的根本,菌种的优劣直接影响食用菌的产量与质量。食用菌的菌种可分为母种、原种和栽培种。在菌种的培育过程中,需要一定的操作技术和设备用具。
(一)、接种室与接种箱 接种室与接种箱能够造成局部的无菌环境。因为食用菌的菌种培育工作,要求在严密的无菌条件下进行。
接种室要求门窗(最好无窗)关闭严密,便于消毒,究竟不宜过大,长2米、宽2米、高2米即可。室内装有日光灯和紫外线灯。
接种箱在母种及原种培育或栽培种生产量不大时,可在接种箱内进行。箱内也要装有日光灯和紫外线灯,正面有玻璃窗,以保证操作与消毒方便。
(二)高压灭菌锅与土蒸锅 高压灭菌锅全称是高压蒸汽灭菌锅,有手提式、立式和卧式三种。高压灭菌锅的优点是灭菌时间短、效果好、省燃料。
土蒸锅可用砖、水泥垒制而成,也可用大号铁锅代替。其优点是容量大,投资小,适于大批量生产。缺点是占地面积大,灭菌时间长(锅内湿度最高达100摄氏度,需维持6-8小时才能达到灭菌效果),费燃料。
(三)恒温箱和培养室 恒温箱即恒温培养箱,适用于母种及原种的恒温培养,可根据不同菌种对湿度的要求进行调节。
培养室用于大量生产菌种。培养室要求保温、洁净、干燥,室内有加热和通风设备以及放置菌种袋(瓶)的架子。
(四)培养菌种的容器 有试管、菌种瓶、塑料袋等。试管多用于母种培育。试管容量小,易操作,不易感染杂菌。
菌种瓶用于培养原种和栽培种。罐头瓶、酒瓶、广口瓶和料瓶的代用品。其优点是成本低,便于运输,装料与取菌均方便,但杂菌感染率略高于瓶装菌种。
(五)接种工具 主要用镊子和接种针。镊子的规格不一,可根据需要选择。主要用于原种扩大繁殖及培育栽培种。
接种针用于繁殖及培育原种,可用自行车辐条制成各种式样的接种针。
(六)化学试剂及药品 无机盐和消毒剂。
食用菌除需要碳、氮营养外,还需要适量的磷、硫、钙、钾、镁等元素,这些元素需要由无机盐类供给。常用的有磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、石灰(CaSO42H2O)、碳酸钙、碳酸镁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸亚铁等。有些无机盐还有缓冲培养基酸碱度的作用。
消毒剂有酒精、甲醛、石碳酸、升汞水、来苏尔等。
二、菌种的培育
用食用菌的孢子或某种部分组织在营养基质上培育出的菌丝体称为母种也叫一级菌种。
(一)母种培养基的配制与灭菌 培养基是供食用菌生长发育所需养分配制而成的营养基质。菌种的不同发育阶段所需培养基的原料成分也不尽相同。
1、母种培养基的配制 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(简称PDA培养基):马铃薯200克+葡萄糖20克+琼脂20克+水至100毫升(下同)。
制法:将马铃薯洗去皮去芽眼,切成蚕豆大小,天平称取200克,放500毫升水中煮沸30分钟,用4层纱布过滤,取汁液,加水至1000毫升,放入20克琼脂继续加热,搅拌到溶化,加葡萄糖20克搅溶,加水定容至1000毫升即成PDA培养基。
PDA培养基是使用最广泛的囊培养基,几乎对所有的母种都适合。
此外还有马铃薯蔗糖琼脂培养基(简称PSA培养基)、马铃薯琼脂培养基(简称PA培养基)和综合马铃薯培养基等。
2、母种培养基的灭菌 灭菌又称消毒,是用物理或化学方法杀死一切微生物。国土资源部厮灭菌是菌种培养的重要环节。灭菌有高压灭菌和常压灭菌两种。高压灭菌省时间省燃料,灭菌效果好,尤其对母种培养基的灭菌,多采用高压灭菌方法。高压灭菌的器具是高压灭菌锅。 灭菌后的培养基,需进行无菌测定,方法是随意抽出3支试管置恒温箱中,25-28摄氏度恒温培养3天,培养基表面仍光滑如初,无菌落出现,证明灭菌彻底,可供接种使用。
(二)母种的培育方法 母种的培育过程分为选择种菇、母种分离、接种、扩大繁殖四个过程。
1、种菇的选择 用作母种分离的种菇,应选择出菇早、朵型好、个体肥大、生长健壮、菌柄长短适中、无杂菌、无病虫害、八成熟的为宜。
2、母种的分离 要想获得纯种,就须通过孢子分离、组织分离和基质内分离三种方法进行。
(1)孢子分离法 分为单孢子分离和多孢子分离两种。
单孢子分离,即在培养基上只接一个担孢子,由它萌发成菌丝体而获得纯菌种的方法。此法技术复杂,生产上很少采用,因此不作详细介绍。
多孢子分离,即把许多孢子接种于同一培养基上,使它们萌发、自由酱来获得纯菌种的方法。此间歇的行,生产上经常采用。其具体操作方法有经下几种。
种菇孢子佳节又重阳弹射法 把选择好的种菇,除去菌柄,用75%酒精将菌盖表面揩擦消毒,在接种箱内,通过无菌操作,用铁支架把种菇菌褶朝下支撑在距离培养皿2厘米处,外罩玻璃罩,下铺无菌纱布,室温下静止12-24小时,菌褶上的孢子就会弹落到培养皿内。通过无菌操作,用接种针沾取少量孢子涤于试管斜面培养基上,在25摄氏度恒温下培养3-4天,孢子便萌发成菌落。选其中孢子萌发早,长势好的菌落,从边缘挑取小块菌丝,进行转管培养。
此外还有,钩悬法、贴附法等。
(2)组织分离法 此法操作简便,取材广泛,菌丝萌发快,后代能保持原菌株的优良性状,不易发生变异。但如果种菇感染了病毒杂菌,则用此法得到的菌丝容易退化;种菇太老、太大,此法得到的菌丝成活率也很低。因幼菇再生力强,所以在组织培养时多选择幼茹种菇。
不同的食用菌,组织割取的部位也有所不同,菇类多以菌柄与菌盖相连处(分生能力最强)为佳。割取前,先用70%酒精擦试或用01%升汞溶液浸泡1-3分钟,再用无菌水冲洗数次,洗去升汞残液,用无菌纱布揩 干。然后将菇体纵向剖开,在菌柄与菌盖相接处割取绿豆大一块菌肉,移至培养基斜面上,待菌丝长出后即转管纯化。
(3)基内分离法 因木耳、银耳的子实体中菌丝含量极少,进行组织分离长话短说不易成功,而只能取其生长的基质即菇林、耳木等进行分离培养,这种分离母种的方法称基内分离法。
其方法是选生长旺盛、无病虫害的2-3年的菇木或耳木一段,充分晾干后,在子实体着生部位,垂直截取1厘米厚的一段,去皮后用75%酒精擦试消毒,然后在酒精灯上轻度灼烧或放入01%升汞溶液中消毒1-2分钟,再用无菌水冲洗数次洗去升残液,无菌吸水纸吸干,尔后用无菌刀片将木块四周劈除,取中间部分辟割成火柴杆粗细约05厘米长的小木梗,取一个放入试管通过上述诸方法所获得的纯种,培养基斜面上,25摄氏度恒温培养,待小木梗周围长出白色菌丝,及时转管纯化。
通过上述方法所获得的纯种,需要从中选出最优的菌株,进一步扩大繁殖,成为生产用母种。
3、接种 食用菌的孢子可部分组织以及菇木小块移接到培养基上的过程就是接种。上述的母种分离过程中实际已经饮食了接种的内容。其具体操作规程是:
(1)准备工作 母种分离一定要在经过消毒的接种箱或接种室内进行,接种前要检查箱或室是否严密无缝隙,以做一日和尚撞一天钟杜绝与外面未经消毒的空气相互流通。消毒前要把母种分离时所用的一切材料用具(种菇、试管、培养基、酒精灯、用塑料薄膜包好的火柴、刀片、镊子、接种针、75%酒精浸过的酒精棉等)无一遗漏地放入接种箱或室中。要注意材料用具摆放的顺序,适合操作程序,取放方便。
(2)消毒灭菌 接种箱内灭菌时,可用小烧杯加10毫升甲醛,放入接种箱内,然后倒入5克高锰酸钾,将烧杯轻轻摇晃后有蒸气产生,迅速封闭接种箱,密闭消毒40分钟。若箱内无红外线灯,则在后20分钟时开启,进行甲醛与紫外线交叉消毒。
(3)接种 接种前先剪短指甲,用肥皂水洗手和前臂,指尖、手指用75%酒精棉球擦拭消毒,然后将手伸进接种箱中操作。首先点燃酒精灯,然后用酒精棉球擦拭种菇表面,尤其是割取组织的部位要重点控试,将刀片在火焰上(外焰)烧一(先烧刀把,逐步移向刀把),把种菇纵剖,在菌盖与菌柄相接处切一黄豆小大的小块,然后将镊子尖在火焰上灼烧消毒,在酒精灯火焰上方把切割组织小块取下来,迅速放上种菇,拿起培养基,同样在火焰上方用小指和无名指拔下棉塞,把试管口和拔下的棉塞都略烧一烧,随即用镊子把组织小块送到试管培养基斜面上,塞好棉塞后,再离开火焰,放好后,用同样方法接种下一管。整批全部接完,再打开接种箱,将接种完毕的试管移入恒温箱中25摄氏度培养。一般3天可长出菌丝,7天可长满培养基斜面。
接种过程应注意:①坚持无菌操作。②注意药物的副作用。酒精渗透力强,因此种菇表面消毒时间不宜过长,以免酒精渗入种菇杀死内部组织和菌丝,导致分离失败。③操作时间不宜拖长,时间越短、动作越迅速杂菌污染的机会就越小。④注意检查杂菌。在母种培养过程中,每天都要观察菌丝生长的状况,若发现培养基上有青、绿、黑红、黄等颜色小点,说明已被杂菌感染,应及早单独分离或将该管淘汰。
4、母种的扩大繁殖 母种分离的成功,仅是菌种生产的第一步,还必须把母种扩大繁殖后,才能接原种。
母种接种一周左右,菌丝已布满斜面,选取洁白健壮的母种试管,连同若干支斜面培养基试管、接种针等用具一齐放入接种箱中,消毒灭菌后进行转管操作,其操作过程如图4-7。
整批试管全部接完后,移入箱培养。注意:整个过程都必须在火焰上方进行;伸入试管的部分都需预先在火焰上消毒;手不要接触试管口,也不要接触棉塞塞入试管的部分;试管口与棉塞可略烧一烧,每个棉塞要分别塞回原来的试管,防止交叉感染;一般每支母种试管一次可扩大培养10支,但不要多次转管,否则会削弱菌丝生活力,降低出菇率。
(三)原种的培育 将母种接种到玉米、麦粒、锯末、玉米芯等培养基上,培养出的菌丝称做原种,也叫二级菌种。制作原种的目的是:①扩大菌种量,满足生产需要;②改换母种菌丝营养条件,使之接近于生产条件,增加适应能力;③对菌种的生命力、纯度进行检验,以免贻误生产。
原种培养的设备用具以及菌种转接的规程与母种基本相同,只是培养基的配制原料、配制方法以及盛装培养基的容器农救会变更了。
1、原种培养基的西方与配制方法
(1)谷料培养基 将谷粒或麦粒、高粱、玉米、稻子等去杂质泥沙,用水浸泡12-24小时(以吸足水分泡透为度),捞出淋水后装瓶灭菌即成。此方适用于蘑菇、平菇、凤尾茹等,也适用于菌种保藏。其优点是营养万分高,菌丝长势壮,缺点是成本造价高。
(2)锯末培养基 锯末78%+米糠(或麦麸)20%+糖(葡萄糖、蔗糖、砂糖、白糖、红糖)1%+石膏粉1%+水。
配制方法是将锯末、米糠、石膏粉按比例称重,拌合均匀,把糖用少量水溶化后,加到料中一起拌匀,继续加水搅拌揉搓,并不断测试含水量,当手用力握料指缝有水渗出并下滴1-2滴时,含水量即在60-65%,最为适宜,即可装瓶灭菌,此方法广泛适于菇类、耳类、猴头、灵芝等食用菌。
同时还有:玉米芯培养基、酒糟培养等。
配制原种培养基时还需了解以下几点:①培养基中的锯末不能用松柏木屑,这些树林有油脂,抑制菌丝生长。②南方农产品副料中的棉籽壳、花生皮等可取代各配方中的玉米芯、锯末、酒糟。③不同各类对培养基酸碱度的要求不同,可用石灰粉或其它碱类调高PH值(呈碱性),用5%稀盐佳节又重阳酸或米醋、酸菜水等调低PH值(呈酸性)。
选用哪种配方应根据当地原料条件,因地制宜安排生产。
2、原种培养基的装袋(瓶)与灭菌 盛装原种培养基的容器主要用罐头瓶,其它广口瓶类也可以。
①装瓶。其程序是:装瓶→水洗→打孔→封瓶
装瓶:将配制好的培养基装入干净罐头瓶中,边装边用拇指向瓶四周轻轻挤压,要求装得上紧下松,周围紧中间松,翻瓶时不倒出为宜。
水洗:每装一瓶后立即水洗。方法是先将瓶下2/3部分在浅水里浸一下即提出,再翻瓶将上1/3部分浸水提出。目的是洗去瓶外沾粘的培养料,避免杂菌附生。
打孔:将水洗后的料瓶用打孔器(上粗下细的圆锥形棒,亦称锥形捣木)在瓶中央从上到下打一到底孔。其作用是提高灭菌效果;笪菌丝迅速蔓延生长。
封瓶:用单层牛皮纸(也可用双层报纸)封瓶口,外缚皮套。皮套可用自行车或手推车内胎剪成。
②灭菌。原种培养基的灭菌,要求同母种培养基灭菌一样严格。
3、接种 经过灭菌的培养基,凉透后即可移入接种箱(室)中进行接种。
①接种前的准备工作。与母种接种大致相同。先检查接种箱的密闭情况,然后将母种菌种、原种培养瓶、封盖塑料、备用皮套及相应用具全部放入接种箱中,消毒灭菌。
②操作方法。先将接种针火焰,然后在火焰上方拔去母种试管棉塞,进行试管口火焰。迅速打开原种培养基瓶中接种孔内。盖上纸盖,上面加盖塑料薄膜,套上皮套即成。同样方法再接下一瓶。一管母种可接种5-8袋(瓶)原种。接种后的原种培养瓶(袋)要移入培养室或温箱中25度恒温培养。
封瓶时,在牛皮纸外加盖塑料薄膜的目的是防止水分蒸发。如果原种培养基采用常压灭菌法,则在装料封瓶时就可加盖塑料膜,随培养基一起灭菌,这样可以减少杂菌污染。
湿度高达30摄氏度以上时,可在早晨和晚上接种,以减少污染,增大成功率。
4培育 原种培育的条件及注意:①培养室清洁卫生,有通风设备;②菌丝培养的最适湿度为25摄氏度。湿度低菌丝生长缓慢,湿度高菌丝生长快,但纤细、生命力弱,一般不宜超过28摄氏度;③空气相对湿度为60-70%;④避免强光与直射光,可无光培养;⑤后期要经济学通风,保持室内空气新鲜;⑥为合理利用究竟,培菌袋(瓶)可重叠摆放3-5层,上下(袋)瓶之间成品字,便于空气流通,避免内层湿度偏高;⑥经常检查。食用菌菌丝一般为奶白色,浓厚粗壮边缘较整齐,生长较慢,杂菌的颜色为红、绿、黑、黄等色,生长快,边缘不整齐。培养时要经常检查,发现杂菌感染要及时淘汰;⑧建立原种培养记录簿,记录母种的来源、型号及生长情况,以便选择优良品种当奶白色菌丝长满全袋(瓶)时,原种即成。
(四)栽培种的培育 用原种扩大繁殖在培养基上的菌丝即为种,是直接用于生产栽培的菌种,也叫三级菌种或生产种。其特点是:①比原种的数量更大;②所用培养基的配方和配制方法与原种相同;③接种前的准备、灭菌、消毒及接种后的培养管理等也都与原种相同;④每袋(瓶)原种可扩接50-100袋(瓶)栽培种。
三、菌种的保藏
一个优良的菌种被选育出来以后,必须保持其优良性状不退化,不污染杂菌,不死亡,才不至降低生产性能。因此,保藏好菌种,对食用菌研究和生产都具有十分重要的意义。
菌种保藏的基本手段是采用干燥、低温、冷冻、减少氧气供给等方法终止其繁殖,降低其代谢强度,使之牌休眠假死状态。菌种保藏主要是母种的保藏,其方法很多,常用的简便易行的有以下几种:
试管封藏法。将已萌发无污染的斜面菌种,从试管口将棉塞剪平,用固体石蜡封口,外包牛皮纸塑料袋,轩冰箱中4-5摄氏度低温保藏,可保藏3-5个月。然后再转管继续保藏(但转管最多不能超过5次)。如果没有冰箱,可埋藏于固体尿素及碳酸铵中,或悬入井底,可保藏2-3个月。 此外还有液体石蜡保藏法、沙土保藏法、滤纸片保藏法等。
原种、栽培种在使用前,也要放在低温、通风、黑暗、干燥处保存。
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