分离鉴定DNA。。不同长度还有不同形态(超螺旋,双链,单链,线性等等)的DNA在电场下的泳动速度不一样。而且凝胶上都是小孔洞。
大的不能穿梭就被缠住,泳动慢,小的在里面穿梭,泳动快,根据这个原理,使用标准的DNA样品。就可以知道目的DNA的大小,,,进一步可以进行分离纯化等。
1967年,Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)具有这种作用:当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇,SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原(在一定条件下,大多数蛋白质与SDS的结合比为14gSDS/1g蛋白质)。由于十二烷基硫酸根带负电,使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质分子原来的电荷量,因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别,SDS与蛋白质结合后,还可引起构象改变,蛋白质-SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒,不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都不一样,约为18nm,因此在电泳时,在凝胶中的迁移率,不再受蛋白质原有的电荷和形状的影响,而取决于分子量的大小,因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量
其主要的优点有:①可以随意控制胶浓度"T"和交联度"C",从而得到不同的有效孔径,用于分离不同分子量的生物大分子。②能把分子筛作用和电荷效应结合在同一方法中,达到更高的灵敏度:10-9 ~10-12 mol/L。③由于聚丙烯酰胺凝胶是由-C-C-键结合的酰胺多聚物,侧链只有不活泼的酰胺基-CO-NH2 ,没有带电的其他离子基团,化学惰性好,电泳时不会产生"电渗"。④由于可以制得高纯度的单体原料,因而电泳分离的重复性好。⑤透明度好,便于照相和复印。机械强度好,有弹性,不易碎,便于操作和保存。⑥无紫外吸收,不染色就可以用于紫外波长的凝胶扫描作定量分析。⑦还可以用作固定化酶的惰性载体。
鉴定基因组时候有降解,即完整性(有的话表现为拖带);是否有RNA污染(有的话可以看出,没空给你放了);是否有蛋白质残留(加样孔);是否和分光光度计测值相符(即测值是否准确)。
电泳是非常有必要的,对评价你的gonomeDNA有很大的意义,
想要表白有点新意,不如加上自己的学科特色吧。九个学科专属表白句子大合集已经准备好啦,还有别样浪漫理科生的三行情书,看看你是否看得懂这些学科特色表白呢?
一、九个学科专属表白句子1、语文:上邪!我欲与君相知, 长命无绝衰。山无陵, 江水为竭,冬雷震震, 夏雨雪 ,天地合 , 乃敢与君绝!
2、数学:如果,我的心是一条X轴,那么你就是那条开口向上与x轴不相交的抛物线,永远都停留在我的心上。
3、英语:No other love but you(除你之外,别无所爱。)
4、历史:我喜欢你这件事,顺应了历史发展潮流,并且完全符合历史发展规律。
5、地理:如果你是大西洋暖流,我就做那静默的摩尔曼斯港。因为暖流的到来,我的世界都暖成了不冻港。
6、政治:你就是上帝为我量身打造的专属法律,带有莫名的强制性,没有办法不欢喜。
7、化学:每当看见你和别的男孩子走在一起,我就原地变成一瓶化学性质十分活波的溶液,PH值小于了7。
8、生物:对你的爱,写在DNA里,刻在每一个碱基对里,即便经过几十个循环电泳,凝胶条带等十分清晰。
9、物理:如果你在条形磁体的南极,我愿意成为它的北极,生生世世,永生永世,绝不分离。
二、理科生的三行情书
1、君生正我为负,入场并同速,场有界乎?
2、君是三吾是九,此生于吾,除了你还是你。
3、此生原做一条RNA,虽然单链,但能拥有U。
4、你是氨基酸,而我是密码子,有且仅有你一个选择。
5、高斯将我的尺规拿走了,那就让我为你,徒手画眉。
6、爱你这件事是个实数,有你的有理,也包含你的无理。
7、安眠药三颗,巴比妥类两毫升,都抵不过你一句晚安好梦。
8、你是0我是1,生活在二进制世界里,我和你就是全世界。
9、我仍旧很喜欢你,像sin平方加上了cos平方,永久如一。
10、你之于我像是万有引力,纵使飞上蓝天,也不舍你温暖双臂。
结语:
本文分享了一些不错的学科表白句子,九大学科一一娓娓道来,希望对你能有所帮助吧。
影响DNA凝胶电泳结果的因素:
DNA分子特性和电泳条件
⑴DNA分子大小 DNA分子越大在胶中的摩擦阻力就越大,泳动也越慢,迁移速率与线状DNA分子质量的对数值成反比
⑵DNA分子构型 对于质粒DNA分子即使具有相同分子质量,因构型不同也会造成电泳时受到的阻力不同,最终造成泳动速率的不同常规电泳中质粒DNA分子的3种构型泳动速率:超螺旋最快、线状分子次之,开环分子最慢
⑶不同的胶浓度 对于同种DNA分子胶浓度越高,电泳速率越慢不同胶浓度对于DNA片段呈线性关系有所区别,浓度较稀的胶线性范围较宽,而浓的胶对小分子DNA片段呈现较好的线性关系所以常规实验中对于小片段DNA分子的分离采用高浓度的胶分离(有时甚至用2%的凝胶),而对于分离大片段则用低浓度的凝胶
⑷电场强度
⑸溴化乙锭 简称EB,电泳中的染色剂,具有扁平结构,能嵌入到DNA碱基对间,对线状分子与开环分子影响较小而对超螺旋态的分子影响较大当DNA分子中嵌入的EB分子逐渐增多时,原来为负超螺旋状态的分子开始向共价闭合环状转变,电泳迁移速度由快变慢;当嵌入的EB分子进一步增加时,DNA分子由共价闭合环状向正超螺旋状态转变,这时电泳迁移速率又由慢变快这个临界点的游离EB质量浓度为01g/ml~05g/ml,即电泳时所加的浓度因此一般电泳可以忽略此因素,而对于特殊电泳,消除此因素影响可采用电泳后染色
⑹电泳缓冲液
一、操作步骤:
1、电泳方法
一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
2、凝胶浓度
对于琼脂糖凝胶电泳,浓度通常在05~2%之间,低浓度的用来进行大片段核酸的电泳,高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎,小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。
3、缓冲液
常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
4、电压和温度
电泳时电场强度不应该超过20V/cm,电泳温度应该低于30℃,对于巨大的DNA电泳,温度应该低于15℃。
5、DNA样品的纯度和状态
注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐,用酚可以去除蛋白。
6、DNA的上样
正确的DNA上样量是条带清晰的保证。注意太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊,而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。
7、Marker的选择
DNA电泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正对照DNA来估计DNA片段大小。Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的,这样对目标片段大小的估计才比较准确。
8、凝胶的染色和观察
实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭(EB),染色效果好,操作方便,但是稳定性差,具有毒性。注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带则不易观察,出现条带模糊的现象。
二、注意事项:
1、巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
2、高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨,造成条带缺失现象。
3、电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲性能下降,可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
4、如果电泳时电压和温度过高,可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。
5、变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失,也可能出现不规则的DNA条带迁移。在上样前不要对DNA样品加热,用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。
6、太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊,而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。
扩展资料
琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。
但由于其孔径相比于蛋白质太大,对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道,现广泛应用于核酸的研究中。
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度002~005为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为02-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
-琼脂糖凝胶电泳
1,虽然不知道你点了多少,如果是1ul,2ul,这个质粒的提取量也就还行,就我的感觉,应该在200ng/ul的浓度或更高(看你点了多少样);
2,不告诉大家你用的marker,分子量试不好说的,更何况,你没酶切过,用质粒与线性的Marker比较没有任何意义。纯度也没什么大问题,质粒提取出现3条是最正常的,4条带表明有基因组DNA污染,但你的这个带很弱,问题不大;稍有疑问的是,你主带的下方还有1,2条更小的带,如果排除电泳污染的话,应该是不同程度的超螺旋所致。
这个提取的质粒,酶切,转化都没问题的。
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